Objetivo:
Determinar cantidad de hemoglobina en la sangre.
Principio del método:
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferrocianuro a meta hemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianometahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de hemoglobina presente en la muestra ensayada.
Significado clínico:
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica a anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatias, deshidratacion o estancia en lugares de gran altitud.
Reactivos
Ferrocianuro de potasio
Cianuro de potasio
Dihidrogeno fosfato de potasio
Material adicional
Espectofotometro
Cubetas de 1 cm para paso de luz
Pipeta de Shally
Tubos
Gasa
Gradilla
Muestra:
Sangre de punción venosa con anti-coagulante EDTA.
Técnica:
1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).
2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).
3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.
4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.
5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO).
7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se efectúe la reacción.
8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.
9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.
1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>. Aparecerá en la pantalla el valor numérico.
2.-Presine < %T> para Transmitancia.
3.-Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.
4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.
6.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y guárdela).
CALCULOS:
ST: .340
OSCAR: .450 (se repitió el procedimiento ya que era un valor alto y se volvió a obtener el mismo)
GUADALUPE: .321
(A)MUESTRA/(A)PATRON*15=gr/dL de hemoglobina en la sangre.
Resultados:
OSCAR: 19.85 gr/dl
GUADALUPE: 14.16 gr/dl
Conclusiones:
Los valores en OSCAR fueron elevados de acuerdo a los valores normales pero se puede deber a un problema en los pulmones ya que es una muestra de un paciente que se encontraba en el hospital mientras que los resultados de GUADALUPE son normales.
Comentario:
Una practica algo confusa pero no dificil.
