RECUENTO DE LEUCOCITOS

RECUENTO DE LEUCOCITOS

OBJETIVO

Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.

FUNDAMENTO

Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.

Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:

·         Dilución de la sangre

·         Muestreo de la sangre diluida en un volumen

·         Recuento de células en ese volumen

Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los  campos 1, 3,7 y 9.

Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.

El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás

MATERIAL

·         Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)

·         Equipo para venopuncion (Tubo lila)

·         Boquilla blanca

·         Tubo de goma

·         Tubos de ensayo

·         Papel parafilm

·         Cámara de Neubauer

·         Cubrehematimetro

·         Microscopio

·         Gasas

SUSTANCIAS

·         Alcohol al 70%  

·         Sangre venosa

·         Liquido de Turk

PROCEDIMIENTO

1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

2

.    Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.    Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4.    Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5.    Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos.

6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.

7.Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

8.    Dejar 3 minutos  que los leucocitos se sedimenten.

9 9.Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar  en los 4 cuadrados angulares.

    

10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

RESULTADOS

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm³

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área 

N° de leucocitos x mm³ = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000

N° de leucocitos x mm³ = 4/200 = 1/50

N° de leucocitos x mm³ = N° de leucocitos contados x 50

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000

CONCLUSIÓN

No pudimos realizar el conteo de leucocitos ya que por cuestiones prácticas nuestros leucocitos se secaron, y nuestro profesor nos dijo que realizaríamos la practica posteriormente.

Es una practica nueva con un procedimiento parecido al conteo de eritrocitos que se enfoca solo en los leucocitos.

COMENTARIO

Se me hizo una practica muy sencilla, y que siendo tan sencilla es muy interesante.

Practica Reticulocitos

Reticulocitos 

Objetivo

Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos.

Introducción

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre)  mediante un colorante supravital.

Cuando en la médula osea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el numero de reticulocitos que salen hacia la circulación.

Materia, Reactivo y Equipo 

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno
• Tubo de ensaye 
• Porta objetos 
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo
• Baño maría 
• Microscopio
• Aceite de inmersión 

Procedimiento 

1.- Mezclar la muestra sanguinea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.

2.- Agregar 5 gotas de colorante con una pipeta pasteur y mezclar

3.- incubar el tubo de ensaye a 37° C durante 15 minutos en el baño maría.

4.- Mezclar la suspensión y realizar un frotis en un porta objetos.

5.- Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el objetivo 100 X.

6.- Buscar celulas que presenten una red con colorante azul ( reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el numero de reticulocitos observados.

Formula:

Resultado: Numero de reticulocitos observados X 100

                _________________________________

                Numero total de eritrocitos 

 Valores obtenidos Muestra 1

Resultado: 3X 100

               ________= 0.33

                   900

Valores obtenidos Muestra 2 

Resultado: 4 X 100

                _______= 0.44

                  900

Valores de referencia

 Adultos:  0.5 - 20%

Recién Nacidos: 2.5 - 6.5 %

Conclusion

Es una practica muy sencilla pero que necesita que las cantidades de reactivo o colorante sean las adecuadas para que se puedan observar de forma correcta los reticulocitos células precursoras del eritrocito.

Practica: Indices Eritrocitarios

Practica: Indices Eritrocitarios

Propósito:

Para realizar esta practica es necesario obtener primero los valores de el conteo de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito presentes en la sangre.

Materiales:

En este caso  se ocuparan todos los materiales necesarios que anteriormente se mencionaron en las practicas pasadas.

Procedimiento:

Realizar el procedimiento respectivo a cada una los cuales ya han sido mencionados en las practicas anteriores.En esta practica solo se realizaran las operaciones correspondientescon los resultados obtenidos del Conteo de Eritrocitos, Hemoglobina y Hematocrito para asi poder resolver los valores de los indices.

Formulas:

Valor Hematocrito% X 10

_____________________= V.C.C En M 3

N°  Eritrocitos / L               Valores Normales 

                                           82-92 M 3

Sustitución

39% X 10

___________= 76.47 m³ 

5.196500

Hemoglobina g/dl X 10

__________________= H.C.M en pg

N° de Eritrocitos / L      Valores Normales 

                                          29-32 pg

Sustitución

14 g/d X 10

___________=  27pg

5.196500

Hemoglobina g/d X 10

_________________= C.H.C.M En %

Valor Hematocrito%     Valores Normales

                                         32- 36 %
R= 35.89 %

Resultados

DATOS
Conteo de eritrocitos: 5.1965x10^6
HTO:39%
Hb: 14 gr/dl

 Conclusion: Fue un poco complicado realizar la practica ya que eran tres procedimientos en el mismo tiempo, pero no es complicada. 

Determinación cuantitativa de hemoglobina

Objetivo: 
Determinar cantidad de hemoglobina en la sangre.

Principio del método:

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferrocianuro a meta hemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianometahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

Significado clínico:
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica a anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias. Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatias, deshidratacion o estancia en lugares de gran altitud.

Reactivos

Ferrocianuro de potasio
Cianuro de potasio
Dihidrogeno fosfato de potasio

Material adicional

Espectofotometro
Cubetas de 1 cm para paso de luz
Pipeta de Shally
Tubos
Gasa
Gradilla

Muestra: 

Sangre de punción venosa con anti-coagulante EDTA.

Técnica:

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).
3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.
4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.

5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO).

7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción.

8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.

9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

PARA HACER LA MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE PROCEDIMIENTO:
1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después  seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>.  Aparecerá en la pantalla el valor numérico.
2.-Presine < %T> para Transmitancia.

3.-Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.

4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.

6.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y  guárdela).

CALCULOS:

 ST: .340

OSCAR: .450 (se repitió el procedimiento ya que era un valor alto y se volvió a obtener el mismo)

GUADALUPE: .321

 

(A)MUESTRA/(A)PATRON*15=gr/dL de hemoglobina en la sangre.

Resultados:

OSCAR: 19.85 gr/dl

GUADALUPE: 14.16 gr/dl

Conclusiones: 

Los valores en OSCAR fueron elevados de acuerdo a los valores normales pero se puede deber a un problema en los pulmones ya que es una muestra de un paciente que se encontraba en el hospital mientras que los resultados de GUADALUPE son normales.

Comentario: 

Una practica algo confusa pero no dificil.

TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO

Objetivo:

Realizar la técnica macroscópica de tamizado, para identificar helmintos que pudiesen estar presentes en las muestras de heces.

Introducción:

El tamizado es un método físico para separar mezclas. Consiste en hacer pasar una mezcla con partículas de diferentes tamaños por un tamiz o colador. Las partículas de menor tamaño pasan por los poros del tamiz atravesándolo y las grandes quedan retenidas por el mismo.

Es un método muy sencillo utilizado generalmente en mezclas de sólidos heterogéneos. Los orificios del tamiz suelen ser de diferentes tamaños y se utilizan de acuerdo al tamaño de las partículas de una solución homogénea, que por lo general tiene un color amarillo el cual lo diferencia de lo que contenga la mezcla.

Para aplicar el método de la tamización es necesario que las fases se presenten al estado sólido. Se utilizan tamices de metal o plástico, que retienen las partículas de mayor tamaño y dejan pasar las de menor diámetro.

En parasitología la técnica de tamizado es usada para detectar a los parásitos que pudiesen quedar atrapados (trematodos, cestodos, nematodos). Esta, permite observar  directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados.

Sustancias:

·         Agua

·         Solución salina al 0.9%

·         Muestra biológica: heces fecales frescas

Material y equipo

·         1 coladera de tamiz fino

·         1 abatelenguas

·         1 caja Petri

·         1 pinzas

Procedimiento

1.       Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2.       Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo más limpio posible.

3.       Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4.       Los parásitos encontrados colocarlos en una caja Petri con solución salina.

5.       Se identifica la parte del parásito o el parásito completo

6.       Se reporta el género y la especie del parásito o parte del parásito. 

Resultado 

NO SE OBSERVO NINGUN HELMINTO, Y EN EL TAMIZADO SOLO QUEDARON RESTOS DE COMIDA COMO CASCARAS O FIBRAS.

 Comentario

Es una tecnica demasiado sencilla y economica, pero no tan eficiente como otras.

Método de concentración por flotación de Willis

Objetivo

Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

Introducción

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio. Los huevos  y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del liquido.
Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica

Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos. 
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

MATERIAL

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         Abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl

·         Sol. De yodo lugol

PROCEDIMIENTO

1.- Tomar aproximadamente 1 gr. de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10 mL. de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del prtaobjetos que esta en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resultados   

OBSERVACIONES

En esta practica observamos huevecillos de Tricocefalos y restos de alimentos, también pudimos observar el movimiento de algunas bacterias debido a el yodo lugol, que permite su movimiento.

COMENTARIO:

Es una practica muy sencilla y economica. Aunque su desventaja es que solo se observan huevecillos que tienen una densidad menor a la del Cloruro de sodio.

PAGINAS CONSULTADAS

www.buenastareas.com

http://www.slideshare.net/monik2010/practica-2-tecnicas-coproparasitologicas

www.ucol.mx/acerca/coordinaciones/cgd/DGEMS/.../manaclinico3.p...