RECUENTO DE PLAQUETAS

OBJETIVO

· Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milímetro cúbico de sangre total
· Identificar morfológicamente las plaquetas coloreadas con Wright en extendidos de sangre periférica y apreciar su número por campo.
· Correlacionar la práctica con la teoría expuesta en clase.

MARCO TEORICO

Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme más pequeño de la sangre; su evaluación en el hemograma manual usualmente sólo se realiza en los extendidos coloreados. En el electrónico, su estudio aporta, además del valor numérico, otros parámetros de importancia diagnóstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A esta valoración la llamamos plaquetograma.
Existen dos métodos para el conteo de plaquetas: manual y electrónico.
PROCEDIMIENTO

El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticuagulada con EDTA y diluida con oxalato de amonio al 1% mediante el uso de la pipeta para dilución de hematíes y el hemocitómetro.
RECURSOS

· Sangre anticuagulada con EDTA
· Solución de oxalato de amonio al 1% y/ o Rees Ecker
· Pipeta para dilución de hematíes
· Cámara de de recuento de Neubauer
· Laminilla de cuarzo
· Caja de Petri con papel de filtro humedecido
· Agitador de pipetas
· Microscopio
· Material bibliografico
· Presentación en Power point

METODO

· Mezcle cuidadosamente, por inversión por lo menos 10 veces, la sangre anticuagulada con el fin de obtener una muestra homogénea
· Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente
· Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solución diluente
· Aspire el líquido diluente hasta la marca 101 exactamente
· Sujeta la pipeta entre los dedos índice y pulgar, desprenda la boquilla y deje en reposo durante 3 minutos
· Agite durante 10 minutos
· Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el líquido del capilar e inmediatamente llene la cámara
· Llene la cámara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente húmedo por 10 minutos. El ambiente húmedo se logra cubriendo la cámara con una Caja de Petri que llevará adherido un disco de papel de filtro humedecido
· Coloque la cámara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la cámara. No debe haber agregados plaquetarios. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central
· Disminuya la intensidad de la luz. Así le será más fácil distinguir y contar las plaquetas
· Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeñas, opacas, redondas o alargadas, medianamente refráctiles, y a veces con prolongaciones
· El número está determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las líneas derecha e inferior.
Cálculo

El número de plaquetas por mm se calcula de acuerdo con:
1. Volumen del área contada: 0.1 mm (1x1x0.1)
2. Dilución utilizada : 1:100
3. Número de células contandas

Plaquetas /mm Número de células contadas X 1 X dilución
Volumen de área contada

Plaquetas/mm = B X 10 X 100

Plaquetas /mm = B X 1000

Valores de Referencia
El rango normal para el recuento de plaquetas es de 150.000 a 400.000xmm

OBSERVACIONES

Las plaquetas se cuentan más fácilmente utilizando microscopio de contraste de fase, pero si el microscopio de luz se adecúa correctamente y el conteo se hace con un estricto control de calidad el resultado será igualmente confiable. Especial atención debe tenerse con las soluciones diluentes.
Estas no deben estar contaminadas, pues tanto las partículas como las bacterias pueden similar plaquetas. Los líquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes de su uso. La limpieza de la cámara de Neubauer y de las pipetas es importante en este procedimiento,
Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso de EDTA como anticoagulante ayuda a disminuir la agregación plaquetaria. El rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de 16 – 25%. No se debe informar el recuento de plaquetas sin confrontarlo con el extendido de sangre periférica, coloreado con Wright.

Imágenes de la practica:

Comentario:

Esta practica es muy importante ya que con ella podemos ver la cantidad de plaquetas que tenemos en la sangre. que son las encargadas de formar coágulos cuando llegamos a tener alguna injuria en nuestro torrente sanguíneo.

Grupo Sanguíneo y Rh.

Determinación de aglutinógenos (tipado globular)

Principio:

En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos llamados antígenos que representan los llamados grupos o factores sanguíneos.

Se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia llamada precursora, llamada sustancia H (HUMANA). Sobre esta sustancia se adhieren carbohidratos en un orden determinado. Par la sangre de tipo cero “O” se unen dos moléculas de galactosa y una de mucosa, una de glucosa y una de glucosamina.

Sobre esta cadena puede adherirse una nueva molécula y se cambia el tipo, si es de glucosamina se tiene el grupo “A” y si es de galactosa se obtiene el grupo “B”. Si se unen ambas moléculas en diversa posición se tiene el grupo “AB”.

Los dos primeros grupos sanguíneos que se descubrieron fueron llamados ABO y actualmente se conocen muchos más.

El sistema Rh es independiente del sistema ABO, pero igual de importante en la tipificación sanguínea.

Hay antígenos presentes en los eritrocitos de casi todas las personas y se les llama Universales, otros antígenos se han concentrado en una sola familia y se les llama familiares, y se han encontrado algunos otros que no perteneces a solo un individuo y se les llama personales.

La importancia de la determinación de los grupos sanguíneos y Rh en el laboratorio es en las transfusiones sanguíneas y en la eritroblastosis fetal.

Factor Rh

Objetivo:

El alumno determinará el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea, y utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

Introducción:

Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinógenos) y los anticuerpos (aglutinas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

Material y reactivos:

- Equipo de extracción sanguínea

- Placa de vidrio excavada

- Aplicadores de madera (palillos)

- Lanceta estéril

- Suero ANTI A

- Suero ANTI B

- Suero ANTI AB

- Suero ANTI D

MÉTODO PARA PORTAOBJETOS O PLACA

Se utiliza la punción cutánea por medio de la placa, se desecha la primera gota y se deposita una gota en cada una de las excavaciones de la placa en forma horizontal o marcar con letras A, B, y Rh, posteriormente se añade una gota de suero Anti A, Anti B y Anti D respectivamente.

Mezclar perfectamente con un hisopo (aplicador) cada preparación (no contaminar las diferentes preparaciones).

Agitar suavemente la placa con movimientos circulares durante 30 segundos aproximadamente.

Leer el resultado (una aglutinación macroscópica indicará la reacción).

Anti A	Anti B	Anti D	El grupo sanguíneo y su Factor será:
+ + - - + + - -	- - + + + + - -	+ - + - + - + -	A Rh positivo A Rh negativo B Rh positivo B Rh negativo AB Rh positivo AB Rh negativo O Rh positivo O Rh negativo

·         En donde (+) existencia de aglutinación

·         En donde (-) ausencia de aglutinación

RESULTADOS.-

1- se determina que el grupo sanguíneo es “O” Factor Rh positivo (+) ya que solo aglutina en el suero Anti D (placa izquierda).

2- se determina que el grupo sanguíneo es “B” Factor Rh positivo (+) ya que aglutina en los sueros Anti B, Anti AB y Anti D (placa derecha)

Conclusión.

Es esta práctica aprendimos a determinar grupos sanguíneos y a su vez mejorar nuestra técnica en venopunción. Pudimos adquirir nuevos conocimientos; los eritrocitos también tienen antígenos en su membrana y son estos los que representan el grupo sanguíneo y permiten la identificación de este a través de los sueros (Anti A, Anti B, Anti AB y Anti D o factor Rh). 

"TINCIÓN DE WRIGHT "

"TINCIÓN DE WRIGHT " 

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

Introducción

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de sangre.

Al conocer la protección de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Pare el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena y en linea.

Material y Reactivos

1.  Frotis sanguineo
2. Microscopio 
3. Aceite de inmersion 
4. Un contador de celulas

Procedimiento 

1. Se  coloca el frotis en el microscopio y  se enfoca.
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersion y se observa con el objetivo de de 100 X
3. Si el recuento se hace en  linea de empieza en el borde de un frotis hasta el otro borde en la linea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los monucleares ( monositos y linfocitos ) y los polimorfonucleares ( neutofilos, eosinofilos y baofilos ) segun su morfologia.
5. Se reportan en % ( Valor relativo) o en valor absoluto ( mm3)

Valores de referencia

                                                      Adultos                                                     Niños 

Linfocitos                                     20-55 %                                                    20 - 50 %  Monocitos                                         2 - 6 %                                                        0 - 9 %     

Eosinofilos                                         1 - 5 %                                                        0 - 8 %     

Basofilos                                            0 - 1%                                                        0 - 1 %      

Neutrofilos                                       45 - 70 %                                                   20 - 60 %    

Bandas                                              0 - 5 %                                                       1 - 6 %      

Conclusión

Esta técnica se utiliza para verificar que la cantidad de células sea normal.

Comentario:

Es una practica muy sencilla para realizar pero que sin embargo se debe tener experiencia para realizarse correctamente.

RECUENTO DE LEUCOCITOS

RECUENTO DE LEUCOCITOS

OBJETIVO

Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.

FUNDAMENTO

Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.

Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:

·         Dilución de la sangre

·         Muestreo de la sangre diluida en un volumen

·         Recuento de células en ese volumen

Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los  campos 1, 3,7 y 9.

Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.

El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás

MATERIAL

·         Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)

·         Equipo para venopuncion (Tubo lila)

·         Boquilla blanca

·         Tubo de goma

·         Tubos de ensayo

·         Papel parafilm

·         Cámara de Neubauer

·         Cubrehematimetro

·         Microscopio

·         Gasas

SUSTANCIAS

·         Alcohol al 70%  

·         Sangre venosa

·         Liquido de Turk

PROCEDIMIENTO

1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

2

.    Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.    Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4.    Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5.    Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos.

6. Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.

7.Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

8.    Dejar 3 minutos  que los leucocitos se sedimenten.

9 9.Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar  en los 4 cuadrados angulares.

    

10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

RESULTADOS

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm³

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área 

N° de leucocitos x mm³ = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000

N° de leucocitos x mm³ = 4/200 = 1/50

N° de leucocitos x mm³ = N° de leucocitos contados x 50

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000

CONCLUSIÓN

No pudimos realizar el conteo de leucocitos ya que por cuestiones prácticas nuestros leucocitos se secaron, y nuestro profesor nos dijo que realizaríamos la practica posteriormente.

Es una practica nueva con un procedimiento parecido al conteo de eritrocitos que se enfoca solo en los leucocitos.

COMENTARIO

Se me hizo una practica muy sencilla, y que siendo tan sencilla es muy interesante.